ГОПКИНСА МЕТОДЫ (F. G. Hopkins, английский биохимик, 1861—1947):
I — количественное определение мочевой кислоты в моче;
II—качественное определение триптофана в цереброспинальной жидкости.
I. Метод количественного определения мочевой к-ты в моче основан на титровании марганцово-кислым калием мочевой к-ты, осаждаемой в виде урата аммония.
Реактивы: р-р 500 г (NH4)2SO4 в 600 мл H2O; р-р 5 г уксуснокислого уранила в 100 мл H2O; р-р для промывания осадка: 100 г (NH4)2SO4 в 99 мл H2O и 10 мл 25% р-ра аммиака; конц. серная к-та.
Ход определения. К 6 мл мочи прибавляют 2 мл р-ра уксуснокислого уранила, содержащего серно-кислый аммоний, и осадок отфильтровывают. К 7,5 мл фильтрата добавляют 10—15 капель 25% аммиака и оставляют на сутки для полного осаждения мочекислого аммония. Осадок промывают специальным р-ром для промывания. К отмытому осадку приливают 3—4 мл дист, воды и 1 мл конц. серной к-ты, размешивают горячий р-р и титруют 0,02 н. р-ром марганцово-кислого калия до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 10 сек. Расчет производят по формуле:
где VT — количество мл 0,02 н. р-ра марганцовокислого калия; VM — объем мочи, взятой для определения; С — количество мг% мочевой к-ты; 3 — поправка на растворимость мочекислого аммония (в расчете на 6 мл мочи).
В норме у человека с мочой выделяется 0,2—0,6 г мочевой к-ты в сутки. Выделение мочевой к-ты увеличивается при патологических состояниях, сопровождающихся усиленным распадом клеток (лейкемия, лейкоцитозы, лихорадка, пневмония, ожоги). Увеличение выделения мочевой к-ты характерно при нефритах, подагре.
II. Метод качественного определения триптофана в цереброспинальной жидкости основан на определении интенсивности фиолетовой окраски, появляющейся при взаимодействии триптофана с оксалатом магния в кислой среде.
Реактивы: р-р оксалата магния — к 10 г порошкообразного металлического магния добавляют 250 мл насыщенного р-ра щавелевой к-ты, после прекращения выделения газа фильтруют в мерную колбу на 1 д, добавлением ледяной уксусной к-ты доводят реакцию среды до кислой (на лакмус), а объем р-ра доводят до 1 л. Конц. серная к-та.
Ход определения. В пробирку наливают 5 мл оксалата магния и добавляют 2 мл цереброспинальной жидкости, слегка встряхивают и осторожно наслаивают 1 мл конц. серной к-ты. В присутствии триптофана на границе жидкостей появляется кольцо фиолетового цвета. Реакция отрицательна в том случае, если появляется кольцо бурого цвета.
Эта качественная проба используется как дополнительный тест при дифференциальной диагностике туберкулезного менингита (см.), при к-ром она положительна; другие формы менингита характеризуются отрицательной пробой на триптофан.
Библиография: Руководство по клиническим лабораторным исследованиям, под ред. Е. А. Кост и Л. Г. Смирновой, с. 398, М., 1964; Hоpkins F. G. On the estimation of uric acid in the urine (Hopkins’ method), J. Path. Bakt., v. 1, p. 451, 1892—1893.
H. В. Проказова.
