ГРИНСПАНА-ФОННЕЗЮ МЕТОД (E. M. Greenspan, V. Fonnesu)— количественное определение мукопротеидов сыворотки крови. Модификация Фоннезю (1960) оригинального метода Гринспана с соавторами (1952) состоит в изменении общепринятого состава биуретового реактива. С диагностической целью содержание мукопротеидов в сыворотке крови определяют при ревматизме, злокачественных новообразованиях, тиреотоксикозе.
Метод основан на растворении мукопротеидов в хлорной к-те (другие белки в этих условиях выпадают в осадок) с последующим осаждением их фосфорно-вольфрамовой к-той. Количество белка в осадке, растворенном в разбавленной щелочи, определяют колориметрически с биуретовым реактивом.
Ход определения
Для экстрагирования мукопротеинов 2,0 мл сыворотки крови смешивают с 4,0 мл 6% р-ра хлорной к-ты и фильтруют через влажный фильтр в течение 1 часа (не менее). К полученному фильтрату добавляют 0,8 мл 5% р-ра фосфорно-вольфрамовой к-ты (H3PO4-12WO3•12H2O), приготовленной на 2 н. р-ре соляной к-ты. Через 10 мин. центрифугируют (10 мин., 2000 об I мин). Осадок растворяют в 1 мл 0,4 н. р-ра едкого натра, добавляют 0,4 мл биуретового реактива (10 мл 1 % р-ра медного купороса — CuSO4•5H2O — смешивают с 50 мл 15% р-ра NaOH). Окраска развивается в течение 1 часа в темноте. Оптическую плотность окрашенного р-ра измеряют при 630 нм. Контроль готовят следующим образом: к 1 мл 0,4 н. NaOH добавляют 0,4 мл биуретового реактива. Стандартный р-р (200 мг казеина растворяют в 100 мл 0,4 н. р-ра NaOH) обрабатывают как опытную пробу. Расчет производят по формуле:
[E опытной пробы•100]/[E стандартной пробы] = количество мукопротеидов, в мг%,где E — величина экстинкции, найденная при колориметрировании. (У здорового человека в сыворотке крови данным методом определяется от 40 до 75 мг% мукопротеидов.)
Количество мукопротеидов в сыворотке крови нарастает при ревматическом процессе (пропорционально увеличению его активности), а также при злокачественных новообразованиях и гиперфункции щитовидной железы.
Описываемый метод отличается специфичностью, однако практическая ценность его снижается из-за необходимости использования большого количества сыворотки крови (2 мл) и трудоемкости постановки.
См. также Кровь, методы исследования.
Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 244, М., 1969; КузьмакН. И. Сравнительная оценка некоторых методов определения серомукоида в сыворотке крови, Лаборат, дело, JVe 3, с. 146, 1970, библиогр.; Методические указания по применению унифицированных клинических методов исследования, под ред. В. В. Меньшикова, М., 1973; Fonnesu V. La determinazione delle mucoproteine (sieromucoide) del siero nell’ ambito delle epatopatie, Minerva med., y. 51, p. 4234, 1960, bibliogr.; G r e e n s p a n E. M. a. o. Serum mucoproteins as aid in differentiation of neoplastic from primary parenchymatous liver disease, J. Lab. clin, med., v. 39, p. 44, 1952.
Л. H. Делекторская.
