КИНГА-АРМСТРОНГА МЕТОД (E. J. King, канадский биохимик, род. в 1901 г.; A. R. Armstrong, канадский биохимик, род. в 1904 г.)— количественный метод определения активности щелочной (КФ 3.1.3.1) ж кислой (КФ 3.1.3.2) фосфатаз в сыворотке крови, служащий дополнительным диагностическим тестом при дифференциальной диагностике заболеваний печени и желчных путей, костей и предстательной железы.
Метод предложен в 1934 г.; он основан на способности фосфатаз гидролизовать двунатриевый фенил-фосфат. Освобождающийся в результате реакции фенол определяют колориметрически с реактивом Фолина — Чокалтеу.
Ход определения активности щелочной фосфатазы
В субстратно-буферном р-ре (2 мл 0,01 М р-ра двунатриевого фенилфосфата и 2 мл 0,06 М р-ра карбонатно-бикарбонатного буфера, pH 10,0) инкубируют 15 мин. при 37° 0,2 мл сыворотки (негемолизированной!), затем добавляют 1,8 мл разбавленного в 3 раза дистиллированной водой реактива Фолина—Чокалтеу (О. Folin, У. Ciocalteu, 1927) и центрифугируют. Для развития окраски к 4 мл надосадочной жидкости добавляют по 1 мл 25% р-ра Na2CO3, выдерживают 5 мин. при 37°, доливают дистиллированной водой до 10 мл и колориметрируют при 660 нм. Контрольную пробу ставят так же, как и опытную, но с добавлением сыворотки крови после окончания инкубации.
Расчет активности фермента производят по калибровочной кривой, построенной с использованием стандартного р-ра фенола.
Ход определения активности кислой фосфатазы
Ход определения активности кислой фосфатазы тот же, что и при определении активности щелочной фосфатазы, но вместо карбонатно-бикарбонатного буфера используют цитратный, pH 4,9. Инкубация продолжается 1 час.
Активность фермента выражают в единицах Кинга—Армстронга. За 1 единицу активности щелочной фосфатазы принимают такое количество фермента, к-рое при условиях опыта в течение 15 мин. катализирует освобождение 1 мг фенола из 0,005 М р-ра двунатриевого фенилфосфата в пересчете на 100 мл сыворотки крови; 1 единица активности кислой фосфатазы рассчитывается на 1 час инкубации при условиях опыта.
В норме активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови человека равна 3—14 единицам, а кислой — 0—4 единицам.
Увеличение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови в 5—10 раз отмечают при механических желтухах, вызванных закупоркой общего желчного протока или мельчайших желчных канальцев (при некоторых токсических желтухах). При других заболеваниях печени (острые гепатиты, цирроз и др.) цифры активности щелочной фосфатазы обычно колеблются в пределах верхней границы нормы либо оказываются умеренно повышенными. Исключение составляет токсическая дистрофия печени, при к-рой активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови достигает огромных величин. Значительное повышение активности этого фермента в сыворотке крови отмечается при остеомаляции, при болезни Педжета и при первичном гиперпаратиреозе. Резкая гиперфосфатаземия наблюдается при злокачественных костных новообразованиях остеобластического типа, но она отсутствует при доброкачественных опухолях и новообразованиях остеолитического типа.
Определение активности кислой фосфатазы имеет исключительно большое значение при диагностике заболеваний предстательной железы, и в частности рака, при которых ее активность в сыворотке крови резко повышается; обычно это свидетельствует о метастазировании опухоли, т. к. при первичном раке активность кислой фосфатазы в сыворотке крови может быть и нормальной. Определение активности этого фермента в сыворотке крови может наглядно свидетельствовать об эффективности противораковой терапии.
См. также Фосфатазы.
Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 160, М., 1969; King E. J. а. Armstrong A. R. Convenient method for determining serum and bile phosphatase activity, Canad. med. Ass. J., v. 31, p. 376, 1934.
Л. H. Делекторская.
