ТРОМБИН

59

Тромбин (син. фибриногеназа) — протеолитический фермент (КФ 3.4.21.5) свертывающей системы крови, катализирующий гидролитическое расщепление фибриногена до фибрин-мономеров, к-рые полимеризуются в фибрин — основу тромба. Тромбин относится к пептид-гидролазам, к подклассу сериновых протеиназ (см. Пептид-гидролазы).

А. А. Шмидт установил, что в циркулирующей крови Тромбин находится в форме предшественника — протромбина, к-рый превращается в Тромбин ферментативным путем (см. Протромбин). В 40-е гг. 20 в. были получены первые препараты очищенного Тромбина. В СССР в 1942 г. было освоено промышленное производство Тромбина из крови лошадей по методу Б. А. Кудряшова для использования в качестве местного гемостатического средства при кровотечениях из паренхиматозных органов.

Тромбин представляет собой гликопротеид с мол. весом (массой) ок. 40 000, содержит ок. 5% углеводов. Изоэлектрическая точка (см.) Т. находится при pH 7,0—7,6. В более щелочной среде и при повышении концентрации белка происходит его аутолиз (см.), в результате к-рого тромбин (альфа-тромбин) превращается в бета- и гамма-формы. Эти формы отличаются от а-тромбина по структуре, не обладают свертывающей активностью, сохраняют эстеразную, амидазную и частично протеолитическую активность. Специфичным ингибитором Т. является гирудин (см.), к-рый необратимо блокирует участок «узнавания» высокомолекулярных субстратов вне активного центра. Природным ингибитором Т. является антитромбин III (кофактор гепарина) — гликопротеид с мол. весом ок. 60 000 (см. Геморрагические диатезы).

Т. представляет собой узкоспецифичную протеиназу. Он гидролизует пептидные, амидные и эфирные связи, образуемые основными аминокислотами, преимущественно аргинином. В своем основном субстрате — фибриногене (см.) — Т. гидролизует три пары пептидных связей, освобождая фибринопептид А (при этом образуется фибрин-мономер, содержащий так наз. пептид В) и три-пептид. Мономеры фибрина без пептидов быстро полимеризуются и стабилизируются в фибрин (см.) фактором XIII. Мономеры с пептидами В полимеризуются ограниченно и образуют высокомолекулярные комплексы с фибриногеном — так наз. растворимый фибрин (см. Паракоагуляция), к-рый появляется в крови при нек-рых патологических состояниях, напр. при синдроме диссеминированного внутрисосудистого свертывания (см. Геморрагические диатезы), и служит показателем тромбинемии.

Тромбин вызывает ограниченный протеолиз нек-рых факторов свертывающей системы крови (см.). Т. действует на клетки крови и стенки кровеносных сосудов: индуцирует агрегацию и реакцию освобождения тромбоцитов (см.), стимулирует синтез ими тромбоксана А2 (см. Простагландины) и фосфорилирование внутриклеточных белков; стимулирует освобождение простациклина (простагландина 12) клетками эндотелия, синтез и освобождение фибронектина (белок, имеющийся на наружной поверхности нормальных клеток); возбуждает специфические хеморецепторы стенки сосудов, инициируя рефлекторную реакцию противосвертывающей системы .

Тромбин образуется из протромбина под влиянием фактора Ха (активного фактора Стюарта — Прауэра аутопротромбина С), находящегося в крови в форме профермента — фактора X (см. Протромбин, Свертывающая система крови).

Состояние конечного этапа процесса свертывания крови (превращение фибриногена в фибрин) отражает тромбиновое время, к-рое определяется по времени свертывания плазмы крови под действием стандартного р-ра тромбина. В норме тромбиновое время составляет 15—18 сек. Удлинение тромбинового времени может быть обусловлено качественными или количественными изменениями фибриногена (см.), напр, при дисфибриногенемии, при гипофибриногенемии (см. Афибриногенемия), накоплением продуктов фибринолиза с антиполимеразной активностью (см. Фибринолиз), а также инактивацией Т., напр, при гипергепаринемии, избытке антитромбинов (см. Геморрагические диатезы), о чем свидетельствует отсутствие коррекции тромбинового времени при добавлении к испытуемой плазме крови фибриногена.

Для определения активности Т. предложено несколько методов. Наиболее часто применяют метод определения времени свертывания 0,1 — 0,5% р-ров фибриногена или плазмы крови исследуемым р-ром Т. Высокочувствительным является метод определения амидазной активности Т. по отношению к высокоспецифичным хромогенным субстратам — n-нитроанилидам трипептидов аргинина, имитирующим участки связывания фермента в молекуле фибриногена. О появлении Т. в крови свидетельствуют повышение содержания в ней продуктов раннего протеолиза фибриногена тромбином — фибринопептида А и растворимого фибрина, снижение концентрации в крови антитромбина III и обнаружение комплексов его с Т., а также появление продуктов реакции освобождения тромбоцитов — тромбоцитарного фактора 4 и β-тромбоглобулина. Анализ этих данных имеет диагностическое значение при синдроме диссеминированного внутрисосудистого свертывания, тромбозе (см.), тромбоэмболии (см.) и др.

Тромбин как препарат

Применяемый в медицинской практике Тромбин получают из плазмы донорской крови. В СССР метод производственного получения высушенного препарата Т. из крови человека был впервые разработан в 1949 г. в Ленинградском ордена Трудового Красного Знамени НИИ гематологии и переливания крови.

Препарат Т. (Tbrombinum) представляет собой белый аморфный порошок без запаха, растворимый в изотоническом (0,9%) р-ре хлорида натрия (pH 6,2—7,2). В р-рах тромбин быстро теряет свою активность. Кроме того, Т. инактивируется под влиянием к-т, щелочей и солей тяжелых металлов.

Активность препарата выражают в ЕА (единицах активности). За 1 ЕА принимают активность такого количества Т., к-рое при t° 37° вызывает свертывание 1 мл свежей плазмы крови в течение 30 сек. или 1 мл 0,1% р-ра фибриногена в течение 15 сек.

По фармакологическим свойствам Тромбин относится к кровоостанавливающим средствам (см.) местного действия. При нанесении р-ра тромбина на поверхность кровоточащей ткани происходит быстрое свертывание крови и образование пленки фибрина, к-рая препятствует кровотечению из поврежденных мелких сосудов.

Т. применяется для остановки капиллярных и паренхиматозных кровотечений при операциях на почках, печени и других паренхиматозных органах, при черепно-мозговых операциях, а также при кровотечениях, напр, из десен, особенно при гипопластической анемии (см.) и болезни Верльгофа (см. Пурпура тромбоцитопеническая).

Препарат применяют местно, растворяя его непосредственно перед употреблением в стерильном изотоническом р-ре хлорида натрия комнатной температуры с соблюдением правил асептики. Р-рами препарата пропитывают стерильные марлевые салфетки или гемостатическую губку, к-рые накладывают на кровоточащую поверхность. Если рану закрывают наглухо, марлевый тампон удаляют сразу после остановки кровотечения. Удалять тампон из раны необходимо с осторожностью, чтобы не повредить образовавшейся фиб-ринной пленки и тромбов. В случае лечения раны открытым способом тампон можно удалять при очередной перевязке. Гемостатическую губку, пропитанную р-ром тромбина, можно оставлять в ране, т. к. губка в ней рассасывается.

Побочное действие Тромбина проявляется относительно редко, гл. обр. аллергическими реакциями.

Тромбин противопоказан при кровотечениях из крупных сосудов. Р-ры тромбина не следует вводить внутривенно и внутримышечно во избежание развития распространенных тромбозов со смертельным исходом.

Форма выпуска: ампулы и флаконы емкостью по 10 мл, содержащие не менее 125 ЕА препарата. Количество и активность препарата указываются на ампулах и флаконах. Сохраняют в сухом месте при температуре от 2 до 10°.

Библиогр.: Зубаиров Д. М. Биохимия свертывания крови, М., 1978; Кудряшов Б. А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания, М., 1975; Лабораторные методы исследования системы гемостаза, под ред. Е. Д. Гольдберга, Томск, 1980; Машковский М. Д. Лекарственные средства, ч. 2, с. 83, М., 1984; Струков А. И. и Струкова С. М. Структурно-функциональные основы гемостаза и его патология, Арх. патол., т. 42, в. 9, с. 3, 1980; Струкова С. М. Структурно-функ-циональные особенности тромбина, в кн.: Биохим. животных и человека, под ред. М. Д. Курского и др., в. 6, с. 26, Киев, 1982; Chemistry and biology of thrombin, ed. bv R. L. Lundblad a. o., Ann Arbor, 1977; ‘Fenton J. W. Thrombin specificity, Ann. N. Y. Acad. Sci., v. 370, p. 468, 1981; The physiological inhibitors of blood coagulation and fibrinolysis, ed. by D. Collen a. o., p. 19, Amsterdam a. o., 1979.

С. М. Струкова; В. К. Муратов (фарм.).

По теме