ГРЕМБЕРА-ВИНОГРАДОВОЙ МЕТОД
Грембера-Виноградовой метод (L. Grimbert, французский химик, 1860—1931; И. Л. Виноградова, советский биохимик) — количественное определение содержания мочевины в сыворотке крови и моче; является вариантом гипобромитного метода определения мочевины, в к-ром чистый бром заменен на его крепкий раствор в бромистом калии. При этом выделение азота значительно ускоряется и происходит за 5—7 мин.
Схема аппарата Коварского для определения мочевины в крови и моче. Аппарат состоит из U-об-разной стеклянной трубки, разделенной двумя кранами на три части: кран 1 — отделяет верхнюю часть градуированной трубки (3), служащей для измерения количества исследуемой жидкости и реактивов, от нижней градуированной части, служащей для измерения объема выделяющегося газообразного азота; трехходовой кран (2) используется для слива жидкости и выпуска газа. Правая половина аппарата заполняется специальным солевым раствором для выравнивания уровней в левой и правой частях. Количество мочевины определяется по количеству выделенного газообразного азота по формуле, приведенной в тексте статьи.
Метод основан на гидролизе мочевины гипобромитом натрия в щелочной среде, сопровождающемся образованием газообразного азота, объем которого измеряется. Реакция протекает по следующему уравнению:
CO(NH2)2 + 3NaBrO → N2 + CO2 + 3NaBr + 2H2O.
Грембером определение выделившегося азота проводилось в у реометре, погруженном в ртуть, И. Л. Виноградова (1967) применила для этой цели аппарат Коварского (рис.).
Ход определения
Белки сыворотки крови осаждают 25% р-ром трихлоруксусной к-ты. Для этого сыворотку смешивают с трихлоруксусной к-той в соотношении 1:1 и центрифугируют. Аппарат Коварского заполняют р-ром NaCl и KCl, приготовленным из расчета 350 г NaCl и 150 г KCl на 1 л воды.
В верхнюю трубку аппарата (3) вводят трихлоруксусный центрифугат (5,0 мл), спускают его в нисходящую часть трубки (4), открывая кран аппарата (1). Таким же способом последовательно вводят 42% р-р NaOH (2,0 мл) и 6,0 мл гипобромитного раствора (55 мл 42% NaOH, 0,2 г йодистого калия в 100 мл) (р-р А); 50 г бромистого калия растворяют в горячей дист, воде, после остывания к ней добавляют 8,5 мл брома и доводят водой до 100 мл (р-р Б); ex tempore смешивают равные объемы р-ров А и Б.
Когда заканчивается образование газа, его объем отсчитывают по делениям шкалы аппарата. При помощи трехходового крана (2) освобождают аппарат от образовавшегося газа и реакционной смеси. Затем повторяют все определение со стандартным р-ром мочевины.
Стандартный р-р мочевины обрабатывают как сыворотку крови, исключая добавление трихлоруксусной к-ты.
При определении мочевины мочи последнюю предварительно разводят дист, водой в 5 раз.
Расчет количества мочевины на 1 л сыворотки крови в граммах производят по следующей формуле: V/V1•0,0025•1000/2,5 = число граммов мочевины на 1 л, где V — объем газа, выделившегося из сыворотки крови; V1 — объем газа, выделившегося из стандартного р-ра мочевины; 2,5 — количество сыворотки крови в 5 мл трихлоруксусной центрифугата; 0,0025 — количество граммов мочевины в 5 мл стандартного р-ра мочевины.
В норме концентрация мочевины в сыворотке крови составляет 20— 40 мг%. С мочой за сутки выделяется 20—35 г мочевины. При острой почечной недостаточности содержание мочевины в крови достигает 300— 500 мг%, иногда 800 мг%; при этом почти прекращается выделение мочевины с мочой (1—1,5 г за сутки).
Гипобромит реагирует не только с мочевиной, но и с другими соединениями азота, содержащими аминогруппы. Поэтому гипобромитные методы определения мочевины уступают в специфичности и точности ферментативным методам с применением уреазы и диацетилмонооксимным методам.
Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 98, М., 1969; Виноградова И. Л. Рациональная модификация гипобромидного метода определения мочевины в крови и моче, Лаборат, дело, № 4, с. 217, 1967; Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследования, под ред. В. В. Меньшикова, с. 66, М., 1973; Guiаrt J. et Grimbert L. Pr6cis de diagnostic chimique, microscopique et parasitologique, p. 127, P., 1922.
Л. H. Делекторская.