МИКРОКАМЕРА

МИКРОКАМЕРА — приспособление для прижизненного микроскопического изучения микроорганизмов.

С помощью М. можно наблюдать развитие, размножение, спорообразование и другие процессы у многих микроорганизмов, а также производить различные микроманипуляции с бактериями и простейшими, живыми клетками человека и животных.

В зависимости от объекта изучения и целей применяются различные М. Развитие микроорганизмов можно изучать непосредственно в тонкостенной чашке Петри на прозрачных твердых питательных средах (см. Петри чашка). Чашку с посевом микроорганизмов переворачивают и без крышки кладут на желатиновую сторону отфиксированной, отмытой и высушенной фотопластинки, желатиновый слой к-рой, впитывая влагу, препятствует отпотеванию камеры. Края камеры подмазывают воском и микроскопируют ее с водной иммерсией.

Для тонких цитол, наблюдений используют специальные М., смонтированные на предметном стекле. На фламбированное покровное стекло (толщина 0,09 мм) наносят каплю горячего агара (см.), к-рому дают немедленно стечь. При этом агар распределяется очень тонким слоем, общая толщина стекла и агара должна быть не более 0,1 мм. На застывший агар пастеровской пипеткой наносят небольшую каплю посевного материала, к-рой дают стечь, остаток капли отсасывают. Затем стекло посевом вниз кладут на два тонких капилляра, прикрепленных воском к тонкому предметному стеклу и отстоящих друг от друга на ширину данного покровного стекла. Края покровного стекла замазывают воском с четырех сторон. Общая толщина камеры не должна превышать 1,5 —1,8 мм. Имеющаяся в камере воздушная прослойка не допускает численной апертуры конденсора и объектива больше единицы.

Рис. 1. Схема изготовления Ш-образной микрокамеры: 1 — разрезы в питательной среде, застывшей на предметном стекле; 2 — вырезанные полоски среды удалены, получен Ш-образный слой питательной среды; 3 — Ш-образная камера: слой питательной среды с покровным стеклом, края стекла залиты воском (обозначен черным цветом).

Лучшей М. для изучения факультативно анаэробных микробов является так наз. Ш-образная камера М. А. Пешкова (рис. 1), позволяющая применять численную апертуру выше 1,0. Для изготовления камеры берут фламбированное предметное стекло не толще 0,5 мм и устанавливают строго горизонтально. На поверхность стекла наливают слой расплавленного агара, толщиной не более 0,2 мм. После застывания среды ее разрезают стерильным скальпелем, как показано на рис. 1,1, и удаляют вырезанные полоски, в результате чего получается Ш-образный слой среды (рис. 1, 2). Посев производят на среднюю полоску, к-рая справа и слева граничит с воздушными канавками. На две крайние полоски и основание буквы «Ш» накладывают стерильное покровное стекло, края к-рого после удаления излишка среды замазывают воском (рис. 1,3). Герметичность и оптическая гомогенность М. исключают возможность испарения влаги и выхода из фокуса при цейтрафферной микрокиносъемке (см.) наблюдаемого объекта.

Рис. 2. Масляная микрокамера (слева — простой конструкции, справа — вырезанная в стекле): А — в разрезе; Б — вид сверху; 1 — микроинструменты; 2 — масло; 3 — исследуемый объект; 4 — покровное стекло.

Для изучения простейших, клеток человека и животных применяют другой тип М.— масляную микрокамеру Фонбрюна. Она проста в изготовлении и обеспечивает все необходимые условия (влажность, газообмен и пр.). От стеклянной пластинки равномерной толщины (1 — 3 мм) отрезают две прямоугольные пластинки размером примерно 6 X 22 мм. Их помещают на другую пластинку на расстоянии 20 мм друг от друга параллельно и симметрично по отношению к поперечной оси. Полоски приклеивают спиртовым р-ром шеллака. На полоски кладут покровное стекло размером 22 х 32 мм. Пространство между прокладками, предметным и покровным стеклами заполняют вазелиновым маслом, к-рое в силу капиллярности хорошо удерживается (рис. 2). Вазелиновое масло химически неактивно и не затрудняет диффузии газов. Т. к. шеллак не выдерживает стерилизации, Фонбрюн (P. Fonbrune) сконструировал такую же камеру, но из цельного куска стекла с вырезанным в нем желобком, высота боковых отверстий к-рого равна 2,5 мм.

Исследуемый материал в капле воды вносят в камеру тонкой пипеткой на внутреннюю поверхность покровного стекла. Капля воды хорошо растекается и сильно прилипает к стеклу, т. к. последнее лучше смачивается водой, чем маслом. Общая толщина масляной камеры для изучения и производства манипуляций с простейшими равняется примерно 5 мм, в связи с чем изучение объектов производят при небольших увеличениях микроскопа.

Масляная М. применяется для многодневных исследований нек-рых процессов у бактерий (напр., образование L-форм), но т. к. данная камера не позволяет работать с большим увеличением микроскопа, ее конструируют таким образом, чтобы общая толщина камеры (предметное стекло, прокладки, покровное стекло с агаром) не превышала 1,5—1,8 мм. На фламбированное тонкое предметное стекло кладут на ширину данного покровного стекла две стерильные прокладки. На фламбированное покровное стекло наносят агар, после его застывания производят посев культуры, затем стекло посевом вниз кладут на прокладки. Края камеры с двух сторон замазывают воском и образованную полость между прокладками, агаром и предметным стеклом заполняют стерильным вазелиновым маслом. В масляной М. нет условий для изучения анаэробных бактерий. Оптические условия в масляной М. чрезвычайно благоприятны за счет близости показателей преломления стекла, масла и агара.

Библиография: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, с. 25, М., 1973.

В. С. Левашев.