РАЙТМАНА-ФРЕНКЕЛЯ МЕТОД • Med-of-Rita

РАЙТМАНА-ФРЕНКЕЛЯ МЕТОД — колориметрический метод определения активности аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланин-аминотрансферазы (АлАТ) в сыворотке крови. Активность этих ферментов в сыворотке крови служит дополнительным диагностическим тестом при ряде заболеваний; повышение активности АсАТ и АлАТ в сыворотке крови наблюдают при инфаркте миокарда, заболеваниях паренхимы печени, особенно при гепатитах, при острых панкреатитах, заболеваниях почек, различных миопатиях, травмах мышц и др.

Метод предложен Райтманом (S. Reitman) и Френкелем (S. Frankel) в 1957 г. и является одной из многочисленных модификаций метода определения АсАТ и АлАТ, разработанного Врублевским (F.Wro blewski). В СССР этот метод принят в качестве унифицированного.

Принцип. В результате реакции трансаминирования (см.), катализируемой АсАТ, образуется щавелевоуксусная к-та, в реакции, катализируемой АлАТ,— Пировиноградная к-та (см. Аминотрансферазы). Щавелевоуксусную к-ту в процессе определения переводят в пировиноградную, к-рая с 2.4-динитрофенилгидразином в щелочной среде образует окрашенный гидра-зон; интенсивность окраски р-ра пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной к-ты и может быть измерена колориметрически (см. Колориметрия).

Ход определения активности АсАТ. Смешивают 0,1 мл сыворотки крови с 0,5 мл предварительно нагретого до t° 37° так наз. субстратного р-ра, для приготовления к-рого 29,2 мг альфа-кетоглутаровой к-ты и 2,66 г аспарагиновой к-ты растворяют в р-ре, содержащем 1 моль NaOH в 1 л (pH полученного р-ра должен быть 7,4), и доливают до 100 мл фосфатным буферным р-ром в концентрации 0,1 моль/л (pH р-ра 7,4). Смесь сыворотки крови с субстратным р-ром инкубируют при 2°37° в течение 60 мин. Затем добавляют 0,5 мл р-ра 2,4-динитрофенилгидразина (19,8 мг 2.4-динитрофенилгидразина растворяют в 100 мл соляной к-ты, концентрация к-рой равна 1 моль/л), выдерживают в течение 20 мин. при комнатной температуре. Добавляют 5 мл р-ра ШОН в концентрации 0,4 моль/л, тщательно перемешивают и оставляют на 10 мин. при комнатной температуре. Колориметрируют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой контрольной пробы. Холостую пробу готовят так же, как и опытную, но р-р 2,4-динитрофенилгидразина добавляют до инкубации.

Ход определения активности АлАТ. Смешивают 0,1 мл сыворотки крови с 0,5 мл предварительно нагретого до t° 31° субстратного р-ра, для приготовления к-рого 29,2 мг альфа-кетоглутаровой к-ты и 1,78 г аланина растворяют так же, как и при приготовлении субстратного р-ра для определения активности АсАТ, инкубируют при t°37° в течение 30 мин. Дальнейший ход анализа такой же, как и при определении активности АсАТ.

Расчет активности ферментов производят по калибровочному графику, в качестве стандартного р-ра используют р-р пирувата натрия (110 мкг/мл), что соответствует концентрации пировиноградной к-ты 88 мкг/мл (1 мкмоль/мл); готовят ряд разведений стандартного р-ра, содержащих 0,05; 0,10; 0,15; 0,20 и 0,25 мкмоль пировиноградной к-ты, к к-рым приливают по 0,5 мл р-ра 2.4-динитрофенилгидразина, далее пробы обрабатывают так же, как и опытные.

Активность ферментов выражают в микромолях пировиноградной к-ты, образовавшейся при инкубации 1 мл сыворотки крови за 1 час при t°37° — мкмоль/час•мл; в единицах СИ — нмоль/(с•л).

Нормальные величины активности АсАТ и АлАТ в сыворотке крови равны соответственно 0,1—0,45 и 0,1—0,68 мкмоль пировиноградной к-ты на 1 мл сыворотки крови за 1 час инкубации при t° 37°.

См. также Кровь, методы исследования.

Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 112, М., 1969; Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии, пер. с болг., с. 873, София, 1968; Reitman S. a. Frankel S. A colorimetric method for the determination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases, Amer. J. clin. Path., v. 28, p. 56, 1957.

Л. М. Пименова.