БОДАНСКОГО МЕТОД

Боданского метод (A. Bodansky, американский биохимик, 1896—1941) — определение активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови. Предложен в 1933 г.

Определение активности фосфатаз применяют при диагностике заболеваний печени, костной системы, предстательной железы.

В основу метода положена способность фосфатаз гидролизовать эфирную связь в β-глицерофосфате. Об активности ферментов судят по количеству освобождающегося при этом неорганического фосфора.

Техника определения

В три пробирки наливают по 5 мл глицерофосфатного буфера. Для определения щелочной фосфатазы буфер готовят с pH=9,0, для определения кислой фосфатазы — с pH=5,1. В две пробирки вносят по 0,5 мл сыворотки крови, а в третью — 0,5 мл воды. Первую и третью пробирки инкубируют при t° 37° в течение 60 мин., после чего во все три пробирки приливают по 4,5 мл охлажденной 10% трихлоруксусной к-ты и содержимое фильтруют (или центрифугируют). Берут по 3 мл фильтрата (или центрифугата) и определяют неорганический фосфор по Фиску-Саббароу (см. Фиска-Саббароу метод). Расчет производят по калибровочной кривой, построенной по стандартному раствору однозамещенного фосфата калия (1 мл раствора содержит 1 мг фосфата).

Результат выражают в миллиграммах выделившегося неорганического фосфора или в единицах Боданского (одна единица соответствует количеству фермента в 100 мл сыворотки, к-рое отщепляет за час при t° 37° 1 мг фосфора из 0,5% раствора β-глицерофосфата). Оптическая плотность 1 мл стандартного раствора соответствует 4 единицам Боданского. В норме активность щелочной фосфатазы составляет 1,5—4 ед., кислой фосфатазы — в пределах 0,5 ед. Единица Боданского приблизительно равна 2,5—3,0 единицам Кинга — Армстронга и 0,7—0,9 единицы Бессея.

В современной энзимологии активность фермента, в т. ч. и щелочной фосфатазы, чаще всего выражают в микромолях расщепленного субстрата. Принцип метода, предложенного Боданским, лег в основу унифицированного метода определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови и в соответствии с приказом министра здравоохранения СССР № 290 от 11 апреля 1972 г. «Об унификации клинических лабораторных методов исследований» рекомендован для всех клинико-диагностических лабораторий.

См. также Фосфатазы.

Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 159, М., 1969.

Н. В. Проказова.